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質粒轉化

簡要描述:質粒轉化 將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化( Transformation )。此感受態細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態細菌的制備,見前)。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面,經 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養基上生長數小時后,球狀細胞復原并分lie增殖。

  • 更新時間:2024-06-17
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將質粒 DNA 導入細菌的過程稱為轉化( Transformation )。此感受態細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態細菌的制備,見前)。質粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復合物黏附于細菌表面,經 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復合物。在豐富培養基上生長數小時后,球狀細胞復原并分lie增殖。被轉化的細菌中,外源基因得到表達。在選擇性培養平板上,可選出所需的轉化子(即含有質粒 DNA 的細菌)。鈣處理的感受態細胞,一般每微克 DNA 能獲得 10 5 ~ 10 6 個轉化子。除化學方法轉化細菌外,還有電穿孔法( Electroporation ),其轉化率可高達 10 9 ~ 10 10 個轉化子 /μg 質粒 DNA 。

二、實驗器材

1.培養皿

2.恒溫培養箱

三、試劑

1.LB 培養基

2.選擇性 LB 瓊脂培養平板(含氨芐qms,終濃度為 50μg/ml )

3.氨芐qms 100 mg/ml

4.宿主細菌:經 100 mmol/L CaCl 2 處理的感受態細菌 DH5α

四、操作步驟

1、取50μL大腸桿菌感受態細胞,加入適量質粒(體積不得超過4μL)冰浴30min后42℃熱激90s ,馬上放回冰上,冰浴2min ;

2、加400μLLB培養基,于37℃搖床慢搖振蕩培養45-60min;

3、取50-100μL涂在含有氨芐qms(100μg/mL)的LB固體培養基上,37℃倒置培養過夜。



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