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透射電鏡檢測時的取材要求是什么?

更新時間:2021-12-24      點擊次數(shù):744
 
  透射電鏡檢測是以電子束透過樣品經(jīng)過聚焦與放大后所產(chǎn)生的物像,投射到熒光屏上或照相底片上進(jìn)行觀察。電子與樣品中的原子碰撞而改變方向,從而產(chǎn)生立體角散射。散射角的大小與樣品的密度、厚度相關(guān),因此可以形成明暗不同的影像。由于電子易散射或被物體吸收,故穿透力低,必須制備超薄切片(通常為50~100nm)。要在機(jī)體死亡后的數(shù)分鐘內(nèi)取材,組織塊要小(1mm3以內(nèi)),常用戊二醛和鋨酸雙重固定,包埋介質(zhì)包埋,用超薄切片機(jī)切成薄片,再經(jīng)醋酸鈾和檸檬酸鉛等進(jìn)行電子染色。
  透射電鏡檢測的取材要求:
  1、定位準(zhǔn)確:解剖水平的準(zhǔn)確定位誤差應(yīng)≤1mm。注意各組實驗動物取材區(qū)位及方位的*性和代表性。
  2、操作迅速:組織離開活體后,以zui快的速度浸入戊二醛固定液,0.5min或zui多2min。事先準(zhǔn)備好l1.5ml尖頭PEP管里面盛滿預(yù)冷的戊二醛固定液。
  3、標(biāo)本尺寸大小:組織塊大小需要在1mm3左右,樣品太大會導(dǎo)致樣品固定不充分。(提示:把較大標(biāo)本塊修整成符合要求的顆粒時,須事先準(zhǔn)備一個蠟盤,滴入戊二醛固定液,把標(biāo)本浸在液滴中修整,確認(rèn)每個小標(biāo)本顆粒都包含需要的結(jié)構(gòu)內(nèi)容,用牙簽挑出3~5粒標(biāo)本,放入l1.5ml尖頭PEP管。)
  4、保持低溫環(huán)境:為降低自溶酶活性,在4℃低溫條件下取材,容器和器械預(yù)冷;將修整好的標(biāo)本塊放入戊二醛固定液后,普通4℃冰箱保存。細(xì)胞取材流程及要求
  取材流程:細(xì)胞直接刮下,細(xì)胞懸液離心,棄上清,PBS清洗2次,離心成團(tuán),加入2.5%戊二醛固定液4℃過夜后快遞。懸浮細(xì)胞、菌液可直接視為細(xì)胞懸浮液操作。
  固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌可直接將菌落挑到PBS中,后續(xù)操作*。
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