大腦皮層神經元原代培養是將胚胎哺乳動物中樞神經系統的部分組織，如大腦皮層、海馬、脊髓等腦組織直接取出，再接種培養的方法。目前國內、外有關神經元培養的方法較多，但在原代培養中神經元的純度和產量方面還存在一些急待解決的問題。由于神經元是一種高度分化的細胞，相對于其它細胞而言，神經元在體外更難以存活和生長。因此，體外培養神經元要求的培養方法和營養條件均較為特殊。

　　大腦皮層神經元原代培養的步驟：

　　1、于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1min，解剖出完整鼠腦；

　　2、預冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質漂洗，用眼科剪將皮質反復剪切成碎塊；

　　3、移入培養皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2m1，37℃培養箱中消化30min；

　　4、將皮層組織碎塊移入離心管，棄去剩余消化液，用接種液洗3次，每次洗滌后使組織塊充分沉降到試管底，棄去上清液；

　　5、最后再用接種液1ml混懸，反復吹打（巴氏吸管）混懸液中組織塊，力度適中，至渾濁后將上清液移入培養瓶待用；

　　6、加入1ml接種液后再次吹打，如此反復3-4次，組織塊逐漸消化后，棄去最終殘塊；

　　7、收集含單細胞懸液的上清液約4-5ml于培養瓶中，以接種液重新懸浮細胞，細胞記數；接種1x107個細胞于6孔培養板中；

　　8、培養24h至細胞貼壁后，換全培養液（DMEM/F12+2%B27，engreen）培養3d，觀察神經元生長狀況；

　　9、換用阿糖胞苷培養液(終濃度2.5ug/ml，換半液)培養3d以抑制神經膠質細胞及雜細胞生長，獲得單純培養的原代神經細胞；

　　10、每隔3d換全培養液1次，每次換半液。