原代細胞分離是指從動物或人體組織中直接分離出細胞，并將組織分散制成細胞懸液后從中獲取目的細胞的過程。是直接取自活組織的細胞，用于體外生長。這些細胞經歷了非常少的群體倍增，因此與連續（腫瘤或人工永生化）細胞系相比，它們更能代表所衍生組織的主要功能成分，成為更具代表性的體內模型。
1、機械分離法：
主要適用于纖維組織和肌肉組織等堅硬組織。
操作步驟：先將樣品用鉗子或剪刀細剁成小碎片，再用組織破碎機或勻漿器等器械破碎，使細胞得以自由分散。最后通過濾網將細胞分離。
2、酶消化法：
是將組織分解成單個細胞的常用方法。
通過選用合適酶的不同濃度、作用時間和溫度，可以使不同類型的細胞得到分離。
常用的消化酶有膠原酶、胰蛋白酶等。
3、貼壁法：
主要適用于基質附著型細胞，例如成肌細胞、成纖維細胞等。
操作步驟：將組織切成適當大小的小塊，置于培養皿中，加入培養液。經過一段時間后，未附著于基質的細胞會被洗掉，貼著基質的細胞則會繼續生長。
4、懸浮培養法：
適用于以血液為基礎的細胞，例如淋巴細胞、白血細胞等。
操作步驟：將血液加入離心管中，慢慢離心分離淋巴細胞、單核細胞等，最后將上清液轉移到新的培養皿中。
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