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探討脊髓神經元原代培養的步驟及條件
更新時間:2024-10-18 點擊次數:970
脊髓神經元原代培養
是一種將胚胎哺乳動物中樞神經系統的脊髓組織直接取出,并進行接種培養的方法。其主要目的是獲取高度分化的脊髓神經元細胞,用于研究神經源性疾病的發病機制、進程,以及神經細胞的發育狀況和生理活性。
脊髓神經元原代培養
的培養步驟:
1、取材:通常選擇胎鼠或新生鼠的脊髓作為培養材料,因為這些時期的脊髓神經元具有較高的增殖能力和分化潛力。取材過程需要在無菌條件下進行,以避免污染。
2、組織處理:將取出的脊髓組織進行仔細剝離,去除脊膜及血管,然后剪成小塊,以便后續消化。
3、消化與分散:使用胰蛋白酶等消化酶將脊髓組織消化成單個細胞懸液。消化過程中需要控制消化時間和溫度,以避免對細胞造成損傷。
4、接種與培養:將消化后的細胞懸液接種到預先涂有PLL等促進細胞貼壁的物質的培養板中,然后置于37℃、5%CO2的培養箱中進行培養。培養過程中需要定期更換培養基,以保持細胞的生長環境。
脊髓神經元原代培養的培養條件:
1、溫度:通常維持在37℃左右,以模擬細胞在體內的生長環境。
2、氣體環境:需要提供5%CO2的氣體環境,以維持細胞的酸堿平衡和生長所需的氧氣濃度。
3、培養基:通常使用含有胎牛血清、阿糖胞苷等營養成分的DMEM培養基,以支持脊髓神經元的生長和分化。
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